詳情請(qǐng)看:HCG在放射免疫法中的測(cè)定
一、原理
HCG是放射性同位素標(biāo)記技術(shù)與抗原抗體免疫反應(yīng)相結(jié)合的超微量分析法,是用放射性核素(如25I/3H)標(biāo)記的極微量的示蹤抗原*(Ag*)/抗體*(Ab*)與待測(cè)抗原Ag/抗體Ag)一起來競爭結(jié)合有限的特異性抗體(Ab)/抗原(Ag),故稱飽和分析或競爭抑制法,其反應(yīng)過程為:Ag*•Ab量固定,Ag*+Ag>Ab可結(jié)合的數(shù)目(抗原過量),Ag*與Ag競爭結(jié)合Ab,直到反應(yīng)達(dá)到平衡,形成的AD*•Ab量隨著Ag量改變:Ag量大,與Ab結(jié)合的機(jī)會(huì)多,Ag*•.Ab少,反之,則形成的Ag*•.Ab多。Ag量與Ag*.Ab量之間可以競爭抑制曲線表示。
二、方法
放射免疫測(cè)定必須有3種基本試劑:
()能與待測(cè)物(配體)專一結(jié)合的結(jié)合試劑,通常是專一抗體受體;
(2)具有放射活性的配體標(biāo)記物,常用的核素有25I及3He;
(3)能將與試劑結(jié)合的配體與未結(jié)合的配體分離的分離試劑。
在競爭性測(cè)定中,加入定量的抗體和標(biāo)記配體,反應(yīng)中未標(biāo)記配體(待測(cè)物)與標(biāo)記配體競爭結(jié)合試劑,未標(biāo)記配體的量愈多,標(biāo)記配體與抗體相結(jié)合的概率就愈低,從而標(biāo)記配體的結(jié)合部分(B)低,經(jīng)過一定時(shí)間抗體與配體的結(jié)合達(dá)到平衡狀態(tài)后,可用分離試劑結(jié)合的配體(B)與未結(jié)合的配體(F)分離,用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)結(jié)合部分(B)標(biāo)本中的HcG量可通過比較標(biāo)本B的計(jì)數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)品的計(jì)數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)曲線)求得。
()25碘一尿HCG(PEG)藥盒組分包括:HCG標(biāo)準(zhǔn)管6瓶,凍干;HCG抗體(藍(lán)色)瓶,凍干;25碘一HCG(紅色)瓶,凍干;正常兔血清5瓶,凍干;磷酸鹽緩沖液瓶,溶液;PEG 瓶,溶液。曲線范圍50~200Iu/L。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),以結(jié)合率為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,依此求得標(biāo)本的HCG一β濃度。
正常參考值:<250U/L。
保存:2~8℃。
有效期:35天。
(2)25碘一HCG(PR=免疫分離試劑)藥盒組分包括:HCG標(biāo)準(zhǔn)6瓶,凍干;HCG抗體(藍(lán)色)瓶,凍干;25碘一HCG(紅色)瓶,凍干;NSB 瓶,溶液;溫育液l瓶,溶液;PR 瓶,溶液。
曲線范圍:25~2000Iu/L。
靈敏度:<25IU/L。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),以結(jié)合率為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以此求得標(biāo)本的HCG一β濃度。
正常參考值:<00Iu/L。
保存:2~8℃。
有效期:35天。
(3)25碘一HCG—B(DAP=雙抗+PEG)藥盒組份包括:
HCG標(biāo)準(zhǔn)6瓶,凍干;HCG—B抗體(藍(lán)色)瓶,凍干;25碘一HCG(紅色)瓶,凍干;DA 2瓶,凍干;溫育液瓶,溶液;PEG 瓶,溶液。
曲線范圍:5~320Iu/L。
靈敏度:5IU/L。
特異性:抗HCG—B血清與LH的交叉反應(yīng)率<5%。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),以結(jié)合率為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以此求得HCG—β濃度。
正常參考值:<20Iu/L。
保存:2~8℃。
有效期:35天。
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