小鼠氧化低密度脂蛋白抗體（OLAb）酶聯(lián)免疫分析試劑盒雙抗體夾心法(檢測未知抗原):1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

標本的采集及保存

1.血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應避免反復凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x 離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應避免反復凍融。

3.組織勻漿: 將動物的組織標本先用PBS洗滌,去除多余血液,勻漿化后放在20 mL PBS中于-20° C放置過夜,第二天,經(jīng)過二次反復凍融破膜,將勻漿物5000x g離心5分鐘,取上清即可檢測。

4.細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。