顯色

取出SDS-聚丙烯酰胺凝膠，經(jīng)超純水清洗2次，每次分鐘，4塊膠分別按4種不同的染色方法顯色。下列每步操作皆在搖床上進(jìn)行。4種染色法成份組成及操作如下：ELISA試劑盒

①傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法：清洗后的凝膠經(jīng)固定液(45.4%甲醇、4.6%乙酸)固定小時(shí)，隨后用染色液(45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.% CBB G250)著色過夜，再經(jīng)洗脫液(5%甲醇、7.5%乙酸)過夜脫色至背景清晰。

②膠體考馬斯亮藍(lán)染色法(colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB)染色法：凝膠先經(jīng)超純水漂洗后，再用colloidal Coomassie blue G250染色液(.6%磷酸、8%硫酸銨、0.02% CBB G250、20%乙醇)著色過夜，洗脫液為超純水，換液3～4次直至背景清晰。ELISA試劑盒

③改良考馬斯亮藍(lán)染色法(modified Coomassie brilliant blue，mCBB)染色法[6];操作方法同膠體考馬斯亮藍(lán)染色法，只是染色液組成不同(0.2% CBB G250、0%硫酸銨、0%磷酸、20%乙醇)，著色小時(shí)即可。

④銀染(silver staining)：凝膠漂洗后先被固定液(50%甲醇+ 5%乙酸)固定小時(shí)，隨后分別用50%甲醇和超純水清洗各0分鐘，0.02 mg/L Na2S2O3 致敏分鐘，超純水清洗2次，每次分鐘，再用預(yù)冷的0.5% AgNO3著色20分鐘，超純水再次清洗2次，每次分鐘，2% Na2CO3 + 0.04% 甲醛顯色20～30秒，當(dāng)溶液變黃以后除去，換新鮮的溶液后繼續(xù)顯色直至顯色適度后，以5%乙酸終止顯色。

操作的安全性與簡便性

由于有機(jī)溶劑的相似作用，我們在改進(jìn)的考馬斯亮藍(lán)染色法里，拋棄有毒的甲醇及氣味難聞的乙酸，同時(shí)在步驟上，我們采用染色和固定一步法進(jìn)行，減少了*步固定的時(shí)間，僅用超純水清洗，縮短了整個(gè)染色及人與有毒物接觸的時(shí)間。結(jié)果顯示，兩種考馬斯亮藍(lán)染色法獲得的圖像背景不比傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法差。

通過我們的摸索及比較分析認(rèn)為，用低毒的乙醇替代甲醇，采用高酸、高離子、快速而簡便的改良考馬斯亮藍(lán)染色法能獲得低背景、高靈敏度、兼容質(zhì)譜的蛋白質(zhì)顯示，能為蛋白質(zhì)組研究、雙向凝膠電泳技術(shù)的蛋白質(zhì)分析提供質(zhì)量的保證。ELISA試劑盒

綜上比較，作為蛋白質(zhì)染色的方法，考馬斯亮藍(lán)法操作便捷、兼容性高，但耗時(shí)較長。經(jīng)改良的考馬斯亮藍(lán)法的檢測靈敏性大大提高，甚至不輸銀染法。而銀染法雖然耗時(shí)短，但步驟較多，且兼容性低。