細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-96℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．5%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為- 到 -2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-96℃)。其方法如下：

．細胞：選對數(shù)生細胞，收集細胞24小時前換液一次。

2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液，計數(shù)，令細胞密度達5×06/ml，離心去上清，吸入離心管中。

3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 分（或甘油）配成0％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加.5毫升細胞懸液。

5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：細胞名稱，凍存日期，以便日后查找。