細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí)，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA，但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割，單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu)，可通過(guò)檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。
(一) 原理
細(xì)胞凋亡的發(fā)生，是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生80bp～200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法，應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu)，可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。
(二)材料與試劑
.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒，生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗
體。
2.過(guò)氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體
3.鏈霉親合素包被的微孔板
4.DNA-組蛋白復(fù)合物，作為陰性對(duì)照。
5.ABTS底物
6.溶解緩沖液
7.溫育緩沖液
8.底物緩沖液
(三)樣品
.培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞的裂解物細(xì)胞裂解步驟：收集細(xì)胞，離心后，用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min。
2.培養(yǎng)細(xì)胞的上清液
3.血漿(血清)