ELISA技術(shù)法的操作要點(diǎn)

 血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。

的試劑，良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要前提。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同即是血清。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP ，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血收縮后即可取得。大部門ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可平等應(yīng)用。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。

標(biāo)本的采取和保留
    可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保留作多次檢測，宜少量分裝冰存。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。如在冰箱中保留過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA 中可使本底加深。保留血清自采集時就應(yīng)留意無菌操縱，也可加入適當(dāng)防腐劑。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測標(biāo)本。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELISA，進(jìn)口ELISA試劑盒均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有具體的使用說明，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果。