大鼠ELISA試劑盒樣本處理要求和注意事項(xiàng)介紹
　　實(shí)驗(yàn)原理
　　大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠鉀離子通道2（PIC2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠鉀離子通道2（PIC2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。
　　樣本處理及要求
　　.血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
　　2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃000×g離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
　　3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.0M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按:9的重量體積比，比如g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~0分鐘，取上清檢測(cè)。
　　4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
　　注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
　　需要而未提供的試劑和器材
　　.酶標(biāo)儀（450nm）
　　2.高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
　　3.37℃恒溫箱
　　4.蒸餾水或去離子水
　　注意事項(xiàng)
　　.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
　　2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
　　3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
　　4.底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
　　5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
　　6.在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
　　7.平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
　　8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
　　9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
　　0.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
　　試劑準(zhǔn)備
　　大鼠ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
　　20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份20×洗滌緩沖液加9份蒸餾水。