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小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體 ELISA試劑盒 使用說明書
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
檢測范圍:每種的檢測范圍都有所不同,具體請查看說明書
特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的指標(biāo),且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
有效期:6個月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法檢測指標(biāo)血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中含量或靈敏度。
小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體 ELISA試劑盒 操作步驟
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品00μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)20分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 00μl(取μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡-2分鐘,200μl/每孔,甩干。 產(chǎn)品名中文(英文)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同標(biāo)記抗體工作液) 00μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡-2分鐘,200μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后5分鐘以內(nèi)進行檢測。
本品用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗HVA抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、化的抗HVA抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HVA呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。. 酶標(biāo)儀(建議參考儀器使用說明提前預(yù)熱)2. 微量加液器及吸頭,EP管3. 蒸餾水或去離子水,全新濾紙
標(biāo)記抗體的稀釋原則:
臨用前以標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔00μl),實際配制時應(yīng)多配制0.-0.2ml。如0μl標(biāo)記抗體加990μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔00μl),實際配制時應(yīng)多配制0.-0.2ml。如0μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。 . 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):×0ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):×0ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):×20μl/瓶(:00)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):×20μl/瓶(:00)
8. 底物溶液(TMB Substrate):×0ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
0. 終止液(Stop Solution):×0ml/瓶(2N H2SO4)。
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