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產品名稱 | 小鼠口腔粘膜成纖維細胞 | 組織來源 | 口腔黏膜組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1347 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
小鼠口腔粘膜成纖維分離自口腔粘膜組織；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通，后經咽峽與咽相續(xù)。口腔內有牙、舌等器官?？谇坏那氨跒榇健缺跒轭a、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結構?？谇唤枭稀⑾卵拦譃榍巴鈧炔康目谇磺巴ィ╫ral vestibule）和后內側部的固有口腔（oral cavity proper）；當上、下頜牙咬合時，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠口腔粘膜成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠口腔粘膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當?shù)霓D速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。
人外周血嗜堿性白血病細胞；KU812 | 人Ph+急淋白血病細胞系；SUP-B15 |
人肺癌細胞；Calu-1 | 地錦草 對照藥材 |
人肺腺癌細胞；NCI-H1975 | 蒼耳子 對照藥材 |
人套細胞淋巴瘤細胞；JeKo-1 | SS瓊脂 對照藥材 |
人小細胞肺癌細胞；NCI-H446 | 骨碎補 對照藥材 |
人成巨核細胞白血病細胞；MEG-01 | 豬牙皂 對照藥材 |
人子宮內膜癌細胞；RL95-2 | 紫蘇梗 對照藥材 |
小鼠睪丸畸胎瘤細胞 | 雞血藤 對照藥材 |
人神經母細胞瘤細胞；SK-N-BE(2) | 百蕊草 對照藥材 |
人胰腺癌細胞系；SW 1990 | 化橘紅(柚) 對照藥材 |
人紅白血病細胞；Kasumi-1 | 馬錢子 對照藥材 |
人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460] | 巴戟天 對照藥材 |
人急性單核細胞白血病單核細胞；AML-193 | 小鼠口腔粘膜成纖維細胞翻白草 對照藥材 |
人結直腸腺癌細胞；NCI-H716 [H716] | 紫荊皮 對照藥材 |
脲酶 (尿酶 巨豆) | 銀杏葉 對照藥材 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
