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小鼠成骨分離自顱骨組織;顱骨位于脊柱上方,由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外,其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié),起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部,內(nèi)有顱腔,容納腦,共8塊。面顱為顱的前下部分,包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu),構(gòu)成面部的支架,共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞,負責骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建,骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區(qū)域,分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì),分泌蛋白酶消化骨基質(zhì),形成骨吸收陷窩;其后,成骨細胞移行至被吸收部位,分泌骨基質(zhì),骨基質(zhì)礦化而形成新骨;破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細胞學基礎(chǔ),也是藥物篩選、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠成骨采用先用yi蛋白酶短時間消化、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠成骨經(jīng)ALP染色檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠成骨細胞 | 組織來源 | 顱骨組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0995 | 細胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗,不做其他科學實驗外的使用!
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
準備工作
1. 實驗器材準備:準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等,并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備:配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶(如、膠原酶等)、胎牛血清、雙抗等試劑,確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實驗動物或組織來源準備:根據(jù)實驗需求,選擇合適的動物并進行相應(yīng)的麻醉或處死,獲取所需組織;或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材:在無菌條件下,迅速取出目標組織,盡量減少對組織的損傷,并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗:將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次,以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切:將組織剪成約1 - 2mm3的小塊,以便后續(xù)消化。
細胞分離
1. 消化:將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中,在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管,使消化更均勻。
2. 終止消化:當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心:用細胞篩過濾細胞懸液,去除未消化的組織碎片,然后將濾液以適當?shù)霓D(zhuǎn)速離心,收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察:每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等,記錄細胞的變化情況,如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常,及時采取相應(yīng)措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測:在需要時,可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測,以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理,避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織,去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶,避免過度消化導(dǎo)致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制(通常 10-30 分鐘),可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基(如 DMEM、RPMI 1640 等),部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次,減少細胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱,可能需要包被培養(yǎng)皿(如膠原蛋白、多聚賴氨酸)。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%,過度匯合會導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作,使用一次性耗材,避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗,但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染(如 PCR 法),污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色,及時更換培養(yǎng)基(通常每 2-3 天換液一次)。
- 異常形態(tài)(如細胞變圓、碎片增多)可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數(shù)有限(一般 5-10 代),需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清(或?qū)S脙龃媾囵B(yǎng)基),梯度降溫后液氮保存。
大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E | 正常大鼠腎細胞;NRK |
大鼠腹水癌細胞;Walker/LLC-WRC 256 | HT50ul機械臂吸頭,透明滅菌濾芯吸頭 |
大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106 | 易壓封手動封口機 |
大鼠骨髓瘤細胞;Y3-Ag 1.2.3 | LT31uL機械臂吸頭,透明吸頭 |
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化) | LT30uL機械臂吸頭,黑色導(dǎo)電吸頭 |
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化) | 0.6ml彩色離心管 |
大鼠肺細胞;WTRL1 | 0.6ml藍色離心管 |
兔卵巢間質(zhì)細胞 | 0.6ml無色離心管 |
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12] | HT50ul機械臂吸頭,黑色導(dǎo)電滅菌濾芯吸頭 |
黃胸鼠肺成纖維細胞;YCR | 50Ul機械臂吸頭,滅菌黑色導(dǎo)電盒裝機械臂吸頭 |
大鼠肝癌細胞;Wrh-f2 | HT300ul機械臂吸頭,透明滅菌濾芯吸頭 |
大鼠正常食管上皮細胞;RNEEC/HL-012 | 300ul黑色適配Hamilton CO-RE機械臂濾芯吸頭,液位感應(yīng),滅菌,盒裝 |
大鼠正常食管上皮細胞;RNEEC/HL-011 | 小鼠成骨細胞HT300ul機械臂吸頭,黑色導(dǎo)電滅菌濾芯吸頭 |
大鼠正常皮膚角質(zhì)細胞;RNSK/HL-010 | HT10ul機械臂吸頭,透明滅菌濾芯吸頭 |
超濾離心管 Millipore 4ml/3kd | HT1000ul機械臂吸頭,透明滅菌濾芯吸頭 |
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