使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
?產(chǎn)品名稱：豬輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒供應(yīng)商
英文名稱：Porcine rotavirus RTPCR
規(guī)格：詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸：低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途：生化實驗，合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑：樣品 RNA。

?

性能指標(biāo)：點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 5-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?髓核細胞生長因子英文名(EN)：4,4′-Thiobisbenzenethiol,≥98.0%CAS No.：9362-77-7規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

小膠質(zhì)細胞生長因子英文名(EN)：4-tert-Butylbenzenethiol,≥99.0 %CAS No.：2396-68-規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

心肌細胞生長因子英文名(EN)：2-Ethylbenzenethiol,≥95.0 %CAS No.：4500-58-7規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

星形膠質(zhì)細胞生長因子英文名(EN)：4-Methoxy-α-toluenethiol, ≥98.0 %CAS No.：6258-60-2規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

星形細胞生長因子英文名(EN)：4-Chlorobenzenemethanethiol,≥98.0 %CAS No.：6258-66-8規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

雪旺細胞生長因子英文名(EN)：2-Chlorobenzenemethanethiol,≥98.0 %CAS No.：3978-00-8規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

支氣道上皮細胞生長因子英文名(EN)：2-Naphthalenethiol,≥99.0 %CAS No.：9-60-規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

支氣管上皮細胞生長因子英文名(EN)：4-Mercaptophenol,≥97.0%CAS No.：637-89-8規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

周細胞生長因子英文名(EN)：3-Mercaptophenol,≥96.0 %CAS No.：40248-84-8規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

滋養(yǎng)層細胞生長因子英文名(EN)：2-Mercaptophenol,≥98.0 %CAS No.：2-24-0規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

5（6）-CFDA英文名(EN)：3,4-Dimethoxythiophenol, ≥99.0%CAS No.：700-96-9規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

5（6）-TRITC英文名(EN)：4-Methoxythiophenol,≥98.0 %CAS No.：696-63-9規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

5-Carboxyfluorescein英文名(EN)：3-Methoxythiophenol,≥98.0 %CAS No.：5570-2-4規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester英文名(EN)：2-Methoxythiophenol,≥97.0 %CAS No.：727-59-6規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

5-FITC英文名(EN)：4-Isopropylbenzenethiol, ≥96.0 %CAS No.：4946-4-9規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

Acridine Orange（AO）英文名(EN)：3,4-Dimethylbenzenethiol,≥97.0 %CAS No.：8800-53-8規(guī)格(SP)：G類別(Key)：多肽試劑

Actin-Tracker Green（微絲綠色熒光探針)英文名(EN)：2,5-Dimethylbenzenethiol,≥98.0 %CAS No.：400-6-0規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑

BCECF AM英文名(EN)：4-Bromothiophenol,≥97.0%CAS No.：06-53-6規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：多肽試劑
豬輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒供應(yīng)商腦膜炎瑟菌A群(NM-A)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)濃縮液 0.ml進口分裝

腦膜炎瑟菌A群(NM-A)核酸檢測試劑盒濃縮液 0.ml進口分裝

腦膜炎瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)濃縮液 0.ml進口分裝

腦膜炎瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒濃縮液 0.ml進口分裝

腦膜炎瑟菌W35群(NM- W35)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)濃縮液 0.ml進口分裝