產(chǎn)品名稱：鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測試劑盒
英文名稱：Mycobacterium avium subspecies paratuberculosisPCR
規(guī)格：詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸：低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途：生化實驗，合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑：樣品 RNA。
性能指標：點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測試劑盒試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月

使用方法:
一、鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測試劑盒樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
注意事項：
①加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應五要素：
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測試劑盒參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 5-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?Goldview染色液英文名(EN)：Orange GCAS No.：936-5-8規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

GTP 5’-三磷酸鳥苷鈉鹽英文名(EN)：Biological stainCAS No.：04-58-6規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

Guanine 英文名(EN)：Mucic acid,98%CAS No.：526-99-8規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

Guanosine 鳥苷；核苷英文名(EN)：n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside,≥99%CAS No.：8568-2-9規(guī)格(SP)：G類別(Key)：通用試劑

GuHCl 鹽酸胍英文名(EN)：D-(?)-TagatoseCAS No.：87-8-0規(guī)格(SP)：250MG類別(Key)：通用試劑

GUS染色試劑盒英文名(EN)：2-Fluoro-2-deoxy-D-glucoseCAS No.：29702-43-0規(guī)格(SP)：25MG類別(Key)：通用試劑

HEPBS英文名(EN)：L-Gulose,98%CAS No.：6027-89-0規(guī)格(SP)：00MG類別(Key)：通用試劑

HEPES英文名(EN)：Heparin lithiumCAS No.：9045-22-規(guī)格(SP)：G類別(Key)：通用試劑

HEPPS英文名(EN)：Zein,≥92.0%CAS No.：900-66-6規(guī)格(SP)：00G類別(Key)：通用試劑

Hochest 33258英文名(EN)：β-Lactoglobulin from bovine milk,≥90%CAS No.：9045-23-2規(guī)格(SP)：50MG類別(Key)：通用試劑

Hochest 33342英文名(EN)：Ciprofloxacin (HPLC,≥98.0%)CAS No.：8572-33-規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑

HRP 辣根過氧化物酶英文名(EN)：Minocycline hydrochloride,98%CAS No.：364-98-7規(guī)格(SP)：00MG類別(Key)：通用試劑

IAA/吲哚乙酸英文名(EN)：RoxithromycinCAS No.：8024-83-規(guī)格(SP)：00G類別(Key)：通用試劑

IBA/吲哚丁酸英文名(EN)：Ketoconazole,98%CAS No.：65277-42-規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

Imidazole 咪唑英文名(EN)：Lomefloxacin hydrochlorideCAS No.：98079-52-8規(guī)格(SP)：G類別(Key)：通用試劑

INT 硝基四唑紫英文名(EN)：Phosphomycin disodium saltCAS No.：2606-99-9規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

IPTG英文名(EN)：Amikacin sulfate saltCAS No.：3983-55-5規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑

IPTG溶液英文名(EN)：Amikacin hydrate,≥98.0%CAS No.：3757-28-5規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑
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