大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶試劑盒使用說明書

使用目的：
本大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）含量。

實驗原理
本大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）水平。用純化的大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS），再與HRP標(biāo)記的誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）濃度。 

試劑盒組成 
30倍濃縮洗滌液 20ml×瓶 7 終止液 6ml×瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（24 IU/L） 0.5ml×瓶
3 酶標(biāo)包被板 2孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 .5ml×瓶
4 樣品稀釋液 6ml×瓶 0 說明書 份
5 顯色劑A液 6ml×瓶 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×/瓶 2 密封袋 個

標(biāo)本要求 
．大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2 IU/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6 IU/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3 IU/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
.5 IU/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.75 IU/L 號標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。