大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）elisa試劑盒銷售說明書

使用目的：
本大鼠極低密度脂蛋白試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中極低密度脂蛋白（VLDL）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本大鼠極低密度脂蛋白試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）水平。用純化的大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入極低密度脂蛋白（VLDL），再與HRP標(biāo)記的極低密度脂蛋白（VLDL）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的極低密度脂蛋白（VLDL）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）濃度。 
試劑盒組成 
30倍濃縮洗滌液 20ml×瓶 7 終止液 6ml×瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（240μg/ml） 0.5ml×瓶
3 酶標(biāo)包被板 2孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 .5ml×瓶
4 樣品稀釋液 6ml×瓶 0 說明書 份
5 顯色劑A液 6ml×瓶 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×/瓶 2 密封袋 個(gè)
標(biāo)本要求 
．大鼠極低密度脂蛋白標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
20μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5μg/ml 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：大鼠極低密度脂蛋白小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。